新型冠状病毒N-卵白检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：新型冠状病毒N-卵白检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
96人份／盒
【预期用途】
本品定性检测血清或血浆样品中新型冠状病毒核衣壳（N）抗原。。。
熏染性非典范肺炎，，，，又称严重急性呼吸道综合症（Severe Acute Respiratory Syndrome，，，，SARS），，，，是一种新泛起的熏染病[1]。。。SARS的致病原已于2003年4月16日由天下卫生组织确定为一种新的冠状病毒，，，，命名为SARS冠状病毒（SARS－CoV）[2]。。。SARS自2002年11月首先在我国广东地区爆发后，，，，已在30多个国家和地区撒播盛行，，，，造成了8422人熏染，，，，其中殒命人数为916（2003年8月7日前统计）[3]，，，，凭证现有资料[4-6]，，，，该病主要通过呼吸道飞沫、体液及污物等方式近距离转播，，，，有家庭群集性和医院群集性的特点。。。其主要的临床特征为起病急，，，，发热、咳嗽、肺部阴影、外周血白细胞不升高或者降低。。。只管对病原体的研究取得了很大希望，，，，但在病原生物学特征，，，，发病机制，，，，早期有用的诊断试剂、特异性治疗等方面的研究尚未获得突破性的希望，，，，尚有一系列的问题需要解决。。。尤其是SARS早期诊断是困扰临床医生对该病及早发明、隔离及治疗等的一浩劫题，，，，由于统一种病毒熏染差别个体可体现出差别的临床特征，，，，而差别的病毒熏染又会泛起相同的临床特征，，，，以是，，，，仅靠临床症状和盛行病学资料很难确定病毒熏染真正的病原，，，，最终简直诊往往需要实验室的诊断，，，，现在尚未有成熟的客观实验室诊断标准。。。由于大大都病毒性疾病尚没有特效治疗药物，，，，实验室诊断已成为控制病毒性疾病盛行和伸张的主要手段。。。当务之急是尽快研究有用的诊断试剂，，，，早诊断、早隔离、切断撒播途径，，，，控制疫情伸张。。。
关于SARS冠状病毒熏染的实验室诊断，，，，现在主要包括以下几种要领：以PCR和基因芯片手艺为基础的分子诊断；；；；；；以抗体监测为基础的血清学诊断；；；；；；以体外病毒作育为基础的病原生物学诊断。。。
现在，，，，对SARS冠状病毒熏染的实验室早期诊断主要是以PCR为基础的病毒核酸测定。。。现有的实验数据显示在发病14天左右病毒核酸的敏感性约莫为70％[7，，，，8]，，，，由于病毒RNA容易降解，，，，检测效果易受样品网络和处理的影响，，，，并且样品污染可以造成假阳性，，，，因此，，，，需要严酷的质量控制和经培训的手艺职员熟练操作。。。另外需要专门的检测仪器并且价钱腾贵，，，，鉴于以上这些因素，，，，有许多医院尚不可开展。。。
以特异性抗体监测为基础的血清学诊断，，，，现在所接纳的要领有两种：酶联免疫吸附法和免疫荧光法。。。血清抗体由阴性转为阳性以及从急性期到恢复期抗体滴度增添4倍以上体现熏染是在近期爆发的。。。由于特异性抗体在发病7～10最先泛起，，，，因此，，，，抗体血清学检测不可用于SARS的早期诊断。。。
以体外病毒作育为基础的病原生物学诊断,从患者标本中疏散到SARS-CoV是实验室诊断的“金标准”，，，，但由于试验条件等的限制，，，，一般不作为通例的要领。。。并且手艺难度高，，，，操作重大，，，，所需时间长，，，，对装备要求高，，，，不适于临床医院使用。。。
以特异性抗体为基础的病原学诊断，，，，是对SARS实验室早期诊断的要领，，，，是用已知的特异性抗体检测样品中病毒抗原。。。用特异性抗体建设病毒抗原诊断试剂盒的手艺难度是需要特异性很高的单克隆抗体或多克隆抗体。。。成熟杂交瘤手艺在多种疾病的免疫学诊断中已起到了重大的作用，，，，由于单克隆抗体具有高度特异的免疫学性子，，，，可以构建高敏感特异的抗原检测试剂，，，，这已被以往多种病毒抗原检测试剂所证实[9-11]。。。
由于已经证实SARS-CoV是一种正义单链RNA病毒。。。；；；；；蜃榻峁蛊饰雠ⅲ，，，SARS-CoV基因编码结构卵白由钉子糖卵白（spike glycoprotein，，，，S）、包膜小卵白（small envelope，，，，E）、膜卵白（membrane，，，，M）和核衣壳卵白（nucleocapsid protein，，，，N）等组成。。。只管对这些结构卵白的功效现在尚不清晰，，，，但从冠状病毒生物学特征研究发明，，，，病毒包膜上的卵白很容易爆发变异，，，，而核衣壳卵白却相对稳固，，，，其抗原性比其他结构卵白强，，，，并且是病毒主要的抗原部分。。。因此，，，，在获得高纯度、高特异性的病毒N抗原的基础上，，，，免疫动物，，，，从而获得高亲和力、高特异性的单克隆抗体和高效价多克隆血清，，，，建设了测定SARS-CoV冠状病毒抗原的试剂盒。。。
【磨练原理】
本品系用纯化的抗新型冠状病毒抗体（3株抗重组N卵白的单克隆抗体）包被的微孔板和兔抗N卵白抗原多抗、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG、阴性比照、阳性比照和显色液及其他须要辅助试剂制成，，，，接纳双夹心法ELISA原理：待测抗原与固相载体外貌的抗体形成抗原抗体复合物，，，，加入兔抗N卵白抗体形成双抗体夹心免疫复合物，，，，然后加入羊抗兔酶标记抗体，，，，形成（抗体－N抗原－二抗－抗二抗酶标记物）免疫复合物，，，，加入底物后在酶作用下爆发颜色反映，，，，通过仪器测定酶促反映的强弱即可定性检测待测样品中的N卵白。。。
【主要组成因素】
1. 本试剂盒包括的组分：
序号 组分名称 主要因素 装量
1 预包被新型冠状病毒N卵白单抗的微孔板 微孔板中预包被3株抗重组N卵白的单克隆抗体。。。 96孔
2 兔抗SARS-COV N卵白抗体 兔抗新型冠状病毒N卵白免疫血清，，，，Tris-NaCl缓冲液，，，，含0.1% Proclin-300、0.001%苯酚红、卵白稳固剂。。。 7.0mL×2支
3 HRP标记的羊抗兔IgG  辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG抗体，，，，硼酸盐缓冲液，，，，含0.1% Proclin-300、0.001%苯酚红、卵白稳固剂。。。 7.0mL×2瓶
4 阳性比照 新型冠状病毒重组N卵白，，，，硼酸盐缓冲液，，，，含0.02%硫柳汞、卵白稳固剂。。。 1.0mL×1支
5 阴性比照 正凡人血清或血浆，，，，硼酸盐缓冲液，，，，含0.02%硫柳汞、卵白稳固剂。。。 1.8mL×1支
6 显色液A 柠檬酸、过氧化氢。。。 6.5mL×1瓶
7 显色液B 柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB）。。。 6.5mL×1瓶
8 浓缩洗涤液（10倍） 磷酸盐缓冲液，，，，含Tween-20，，，，10倍浓缩。。。 50mL×2瓶
9 终止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。。。 6.5mL×1瓶
10 密封袋  1个
11 封板膜  4片
12 纪录纸  1份
注：兔抗SARS-COV N卵白抗体、酶标记物、阳性比照、阴性比照，，，，必需使用试剂盒配备的，，，，差别批次不可混用。。。显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤液为通用试剂，，，，差别批次可以混用。。。
2. 需要但未提供的质料：
蒸馏水或去离子水
微孔板洗濯器
5μL～40μL、40μL～200μL 、200μL～1mL移液器与一次性吸嘴
37℃恒温装备
微孔振荡器
酶标仪
60分钟或更长时程的计时器
【贮存条件及有用期】
于2℃～8℃避光生涯，，，，有用期为6个月。。。
拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内2℃～8℃生涯。。。各组分拆封后应在一个月内用完。。。
生产日期、失效日期：详见标签。。。
【适用仪器】
具有450nm波长的酶标仪
【样本要求】
采样注重事项：因SARS冠状病毒有较强的熏染性，，，，能通过近距离亲近接触撒播，，，，收罗样本时必需做好充分的清静防护。。。采样容器用专用管架盛载。。。采完样后连忙密封送检。。。此类标本应由专人专柜隔离生涯。。。须标记清晰，，，，切勿与其它病原体标本混放。。。采样历程应严酷按《熏染性非典范肺炎病例实验室检测标本收罗手艺指南》操作执行。。。
静脉采血后，，，，室温放置1～2小时，，，，离心疏散出血清；；；；；；如取血浆，，，，采血后可直接离心疏散血浆。。。如在24小时之内使用可于2℃～8℃中生涯，，，，恒久存放应生涯在－20℃以下，，，，并阻止重复冻融。。。高浓度的脂类、胆红素及溶血样本或微生物污染对测定效果的影响尚未确定。。。
血清样本或血浆样本于56℃灭活30分钟，，，，对测定效果没有影响，，，，其他灭活条件对测定效果的影响尚未确定。。。
【磨练要领】
1.  试验历程注重事项
1.1  试剂盒各组分从冷藏情形中取出时，，，，应在室温平衡至无潮气方可使用。。。差别批试剂组分不得混用。。。拆封后未用完的包被板应放入密封袋内生涯。。。
1.2  试剂盒不要长时间放置于室温下，，，，应于2℃～8℃生涯，，，，阻止冰冻，，，，并在有用期内使用。。。在贮存及孵育历程中，，，，应阻止强光直接照射。。。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。。。
1.3  为阻止试剂或样品的微生物污染及交织污染，，，，应使用一次性吸嘴，，，，不要重复使用。。。
1.4  在取用比照品、兔抗SARS-COV N卵白抗体和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，，，，加样前，，，，使用微孔振荡器充分混匀样品。。。
1.5  严酷遵守划定的孵育时间和温度。。。若是第一孔与最后一孔加样时间距离太长，，，，将会导致差别的“预孵育”时间，，，，从而影响丈量值的准确性及重复性。。。
1.6  洗涤竣事时，，，，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻小扣打，，，，确保所有孔内均无残留洗涤液，，，，阻止爆发泡沫。。。若是使用自动洗板机，，，，应注重准确操作。。。
1.7  每次试验必需设阴性及阳性比照。。。
1.8  试验操作应严酷遵守《熏染性非典范肺炎实验室生物清静操作指南》。。。
2.  试验准备
2.1  试剂盒反映试剂准备
2.1.1  微孔条
将检测所需数目的微孔条牢靠于板架上，，，，剩余的微孔条放入密封袋中生涯。。。
2.1.2  洗涤液
在清洁的量筒内稀释浓缩洗涤液。。。50mL浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500mL，，，，混匀。。。
2.1.3  其它液体组分
直接使用，，，，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。。。
2.2  样品准备
待检样品不必稀释，，，，充分混匀后使用。。。测定临床样本时必需严酷凭证卫生部、科技部、国家食物药品监视治理局公布的《熏染性非典范肺炎病毒研究实验室暂行治理步伐》。。。
3.  检测历程
3.1  每次实验每板须设空缺孔1孔、阳性比照2孔、阴性比照3孔。。。浚浚？？
？杖笨撞患友贰⑼每筃卵白抗体和酶标记物，，，，只加洗液、显色液A、B和终止液；；；；；；阳性比照、阴性比照直接使用，，，，100L/孔。。。其余每孔加入样品100L。。。
3.2  加封板膜置37℃温育60分钟。。。
3.3  吸净孔中液体，，，，洗板5次，，，，每次停留30秒后甩净拍干。。。
3.4  除空缺比照外每孔加兔抗N卵白抗体100L，，，，加封板膜置37℃温育60分钟。。。
3.5  吸净孔中液体，，，，洗板5次，，，，每次停留30秒后甩净拍干。。。
3.6  除空缺比照外每孔加酶标记羊抗兔IgG抗体100L，，，，加封板膜置37℃温育60分钟。。。
3.7  吸净孔中液体，，，，洗板5次，，，，每次停留30秒后甩净拍干。。。
3.8  拍干后各孔滴加显色液A、B各50L，，，，置37℃避光10分钟，，，，每孔连忙加入终止液50L，，，，稍微震荡微孔板以混淆匀称。。。
3.9  以空缺孔调零，，，，用酶标仪读取450nm处的A值。。。
4.  质量控制
阳性比照A值平均值≥0.50，，，，阴性比照A值平均值≤0.20，，，，证实实验建设。。。
【阳性判断值】
临界值（CUT OFF）＝0.09＋阴性比照平均A值（当阴性比照平均A值小于0.10时，，，，按0.10盘算；；；；；；当阴性比照平均A值大于或即是0.10时按现实值盘算），，，，效果判断如下：
样品A值＜临界值×0.8                   阴性
临界值×0.8≤样品A值＜临界值            可疑
样品A值≥临界值                        阳性
【磨练效果的诠释】
1. 本试剂盒临界值是依据检测1297例康健人血样及临床审核的检测效果而确定。。。
2. 本试剂盒的检测效果不是临床顺应症的唯一确认指标，，，，测定效果要亲近连系临床指征及其他测定效果举行综合剖析。。。
3. 可疑及阳性样品应举行第二次实验来复核，，，，并举行双孔测定。。。
4. 关于检测效果阳性的报告，，，，只批注该样品中有新型冠状病毒的卵白保存，，，，并不批注有活病毒保存，，，，或病毒量足以熏染其他人。。。
5. 临床审核效果批注，，，，本品的测定效果会因采样时间的差别而异，，，，因此检测为阴性的样品不可扫除新型冠状病毒的熏染。。。
6. 可疑样品除重复检测外，，，，还应当对该病例举行高密度一连采样（如天天一次）并实时检测抗原，，，，以期尽早地确定其是否熏染；；；；；；有条件时也应当追踪其更早期的血清标本并检测抗原，，，，以扫除已经错过其抗原峰值期的可能性；；；；；；关于发病10天后的病例，，，，应当同时举行抗体检测。。。
【检测要领的局限性】
1. 本品所用抗系统针对新型冠状病毒核衣壳卵白，，，，其迅速度和特异性虽已举行了相关的实验室和临床研究确证，，，，但鉴于现在关于SARS各发病阶段，，，，病毒在人体各组织部位的漫衍及一连时间等方面的基础研究事情尚有待深入，，，，因此，，，，其迅速度和特异性还需进一步的研究与确证。。。
2. 试验效果虽然批注本检测系统与特异性项目中所列病毒的作育液无交织反映性，，，，但未举行这些病毒熏染样本的临床审核。。。与其他（特异性项目中所列病毒以外）病原体的交织反映尚没有实验数据。。。
3. 本试剂使用鼠单克隆抗体及兔多克隆抗体，，，，因此阳性效果也可能是某些患者体内具有高滴度人抗鼠某人抗兔抗体所引起的，，，，如诊断或治疗中接受过鼠单克隆抗体制剂的患者等。。。
4. 本品对临床确诊SARS患者一连监测的效果批注，，，，只有在病程的早期（1～10天），，，，本品才有相对较高的阳性检出率，，，，而在发病晚期，，，，本品检测效果大都为阴性。。。
5. 关于检测阴性的样本，，，，不可完全扫除样本中新型冠状病毒的保存。。。以下原因均可导致阴性效果：
5.1 患者并未熏染新型冠状病毒，，，，而是由其他并未测定过的病原体（如病毒、细菌、真菌等）引起发病。。。
5.2 由于检测迅速度限制，，，，造成假阴性效果。。。
5.3 样本中的病毒或病毒卵白可能只在一定的时期内保存，，，，样本并未在病毒或病毒卵白保存时被收罗。。。
6. 现在对血狷介滴度抗体是否影响抗原检测效果尚有待进一步研究。。。
【产品性能指标】
1. 外观
包装盒应整齐，，，，产品批号和有用期准确清晰。。。液体组分应清亮，，，，无沉淀物或絮状物。。。
2. 阴性参考品切合率
16份阴性参考品检测效果不得泛起假阳性（16/16）。。。
3. 阳性参考品切合率
16份阳性参考品检测效果不得泛起假阴性（16/16）。。。
4. 最低检出量
共7份，，，，要求至少检测出4份为阳性样品，，，，并且基质血清必需阴性，，，，即4/7。。。
5. 细密性
用细密性参考品举行检测，，，，CV（%）应不高于15％（n＝10）。。。
6. 稳固性试验
出厂前37℃放置3天后举行检测，，，，其阳性参考品切合率、阴性参考品切合率、最低检出量和细密性均应切合要求。。。
7. 生物清静性
试剂盒中比照品要求HBsAg、HIV-Ab、HCV-Ab及梅毒螺旋体抗体检测为阴性。。。
【注重事项】
1．本品所有试剂均不具有熏染性，，，，但仍需按熏染性物质看待。。。
2．任何临床样本都应作为具有熏染性样品看待。。。各项试验要参照执行由科技部、卫生部、国家食物药品监视治理局、国家情形保；；；；；ぷ芫至舷路⒌摹堆拘苑堑浞斗窝撞《狙芯渴笛槭以菪兄卫聿椒ァ泛汀堆拘苑堑浞斗窝撞《镜亩局稚摹⑹褂煤脱径锬Ｗ拥脑菪兄卫聿椒ァ返挠泄鼗。。。
3．样本的收罗要领对采样职员有一定的危险性，，，，采样职员应高度重视清静防护。。。
4．实验室中所有种种废弃物都应按熏染物处理。。。实验中用过的吸头应直接打入盛有1%次氯酸钠的废物缸内，，，，并与其它废弃物一同在指定的所在以指定的方式举行焚烧或毁弃。。。
5．试验竣事后应连忙清洁事情台。。。事情台及种种试验用品应按期用1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯举行消毒。。。
6．注重阻止皮肤或黏膜直接接触试剂或样品。。。显色液中含TMB，，，，终止液含硫酸。。。含TMB的试剂在试验中会诱发其它反映；；；；；；含硫酸的试剂有侵蚀性。。。一旦接触到这些液体，，，，应连忙用水彻底洗濯。。。
【标识的诠释】
包装标签
的标识    
标识的寄义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
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【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道立异四路18号     邮政编码：519085
联系方式：电话号码：0756-3890858         传真号码：0756-3890848
售后服务单位名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
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生产地点：珠海市唐家湾镇港湾大道立异四路18号     邮政编码：519085
生产允许证编号：粤食药监械生产许20040941号
【医疗器械注册证书编号/产品手艺要求编号】国械注准20173401143
【说明书批准及修他日期】2017年6月28日